為什么用分光光度計測量吸光度時讀數(shù)會不斷變化？

來源：北京普析通用儀器有限責任公司 2020年11月13日 11:40

　　為什么用分光光度計測量吸光度時讀數(shù)會不斷變化？是因為顏色反應還沒有完成嗎？經(jīng)分析發(fā)現(xiàn)并非如此。靈敏度越高，吸光值頻移越大。分光光度計的設(shè)計原理和工作原理允許吸光值在一定范圍內(nèi)變化，儀器具有一定的精度和準確度。

　　1.樣品稀釋濃度

　　樣品的稀釋濃度也是一個不可忽視的因素，因為樣品中，尤其是核酸樣品中，不可避免地存在一些細小的顆粒。這些小顆粒的存在干擾了測試結(jié)果。為了在很大程度上減少顆粒對測試結(jié)果的影響，要求核酸的吸光值至少應大于0.1A，吸光值應優(yōu)選在0.1和1.5a之間.在這個范圍內(nèi)，粒子的干擾相對較小，結(jié)果穩(wěn)定。這意味著樣品的濃度不能太低或太高(超出光度計的測量范圍)。

　　2.核酸本身的物理化學性質(zhì)

　　溶解核酸的緩沖液的pH值、離子濃度等也會導致檢測時的讀數(shù)漂移。所以建議使用一定pH值和較低離子濃度的緩沖液(如TE)來大大穩(wěn)定讀數(shù)。核酸的吸光值效應受緩沖溶液的酸堿度和離子濃度的影響。只有在一定的pH值和低離子濃度(如10mt ris-hclph 8.0)下，才能獲得準確的檢測結(jié)果。水的pH值不穩(wěn)定，可能導致檢測誤差。一些緩沖劑在紫外線范圍內(nèi)吸收自身。為確保準確測量，請使用與懸浮或洗脫樣品時相同的緩沖液。

　　3.分光光度計的操作因素

　　1)使用儀器前，用戶應首先了解儀器的結(jié)構(gòu)和工作原理，以及各控制旋鈕的功能。

　　2)儀器應放置在干燥的室內(nèi)，使用時放置在牢固穩(wěn)定的工作臺上。室內(nèi)光線不宜太強。熱天不能用電風扇直接吹樂器，以免燈泡燈絲不穩(wěn)定發(fā)光。

　　3)接通電源前，應檢查儀器的安全性能，電源接線應牢固，通電應良好，各調(diào)節(jié)旋鈕的啟動位置應正確，然后接通電源開關(guān)。當儀器沒有連接到電源時，血糖儀的指針必須在“0”劃線上。否則，可以用儀表上的校正螺釘進行調(diào)整。

　　4)如果測試波長變化較大，請稍等，燈處于熱平衡后，重新校準“0”和“100”點，然后再次測量。

　　5)使用完比色皿后，立即用蒸餾水沖洗干凈，并用干凈柔軟的紗布擦去水跡，防止表面光滑度受損，影響比色皿的透光率。

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