酶聯(lián)免疫吸附劑測定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體上，利用抗原抗體特異性結(jié)合進行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測方法。利用這種基于抗原抗體雜交的技術(shù)，我們可以量化檢測可溶性物質(zhì)，如蛋白質(zhì)，在ELISA中，抗原作為目標(biāo)分子，被固定在（特定的固相載體上），并被特異性的，與酶偶聯(lián)的抗體檢測，當(dāng)提供無色底物時，酶產(chǎn)生可測量的有色底物。

ELISA法是免疫診斷中的一項新技術(shù)，現(xiàn)已成功地應(yīng)用于多種病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷。也已應(yīng)用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定，根據(jù)已經(jīng)使用的結(jié)果，認為ELISA法具有靈敏、特異、簡單、快速、穩(wěn)定及易于自動化操作等特點。不僅適用于臨床標(biāo)本的檢查，而且由于一天之內(nèi)可以檢查幾百甚至上千份標(biāo)本,因此，也適合于血清流行病學(xué)調(diào)查。本法不僅可以用來測定抗體，而且也可用于測定體液中的循環(huán)抗原，所以也是一種早期診斷的良好方法。因此ELISA法在生物醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域的應(yīng)用范圍日益擴大。

酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）是血清學(xué)檢測方法，既可以檢測抗原也可以檢測抗體，主要包括間接ELISA、競爭ELISA、捕獲 ELISA以及雙抗夾心ELISA。其中，間接 ELISA操作相對簡便，結(jié)果清晰，在抗體的檢測中最為常用。該方法靈敏度高、特異性好，并且可以實現(xiàn)批量檢測，適合用于對臨床樣品的大批量檢測。

實驗步驟

間接法 - 常用于檢測抗體

（1）按實驗需求配置標(biāo)準(zhǔn)品，S0-S7；

（2）稀釋待測樣本和加樣；

（3）配置抗體，加樣，室溫孵育1-2h；

（4）配置洗滌液；

（5）洗板；

（6）配置辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液（HRP）；

（7）3次洗滌結(jié)束后，加入稀釋后的 HRP 100L/孔，室溫孵育1h；

（8）洗板；

（9）加底物溶液；

（10）加終止液；

（11）加入終止液，使用酶標(biāo)儀測定各孔吸光值（OD 值）。

注意事項

溫育是ELISA測定中最容易出現(xiàn)問題的步驟。溫育溫度應(yīng)在37℃，水浴。溫育時間應(yīng)按照試劑說明書上的時間嚴格執(zhí)行。溫育實際測定操作中要注意以下幾點：

1）要保證在設(shè)定的溫度下有足夠的反應(yīng)時間。溫育時間不夠，弱陽性樣本測不出來。

2）因為采用水浴，所以在溫育時一定要封板，防止水蒸氣形成水滴掉入反應(yīng)孔內(nèi)造成污染，并有可能整板花板。

全自動洗板機的使用應(yīng)注意以下幾點：

1）洗板前，應(yīng)檢查洗液瓶、蒸餾水瓶是否充足，廢液瓶是否滿瓶。

2）在自檢過程中注意觀察洗液灌注是否通暢，排液是否通暢。3）在洗板過程中，應(yīng)注意觀察反應(yīng)孔每孔是否灌滿且無外溢，每孔吸水是否吸盡，并且要保證洗液在孔中放置的時間。如果手工洗板的話就更需要操作者的操作技巧。

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