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原代細胞培養(yǎng)過程中可能存在哪些問題呢?

來源:北京百奧創(chuàng)新科技有限公司   2023年10月13日 15:56  

細胞培養(yǎng)是生物學和醫(yī)學研究常用的手段之一,可分為原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)兩種。原代培養(yǎng)是直接從生物體獲取組織或器官的一部分進行培養(yǎng),也稱初代培養(yǎng)。嚴格地說即從體內(nèi)取出組織接種培養(yǎng)到第一次傳代階段,但實際上,通常把第一代至第十代以內(nèi)的培養(yǎng)細胞統(tǒng)稱為原代細胞培養(yǎng)。由于培養(yǎng)的細胞剛剛從活體組織分離出來,故更接近于生物體內(nèi)的生活狀態(tài)。這一方法可為研究生物體細胞的生長、代謝、繁殖提供有力的手段。原代細胞培養(yǎng)越來越多地用作細胞和分子生物學的主要工具,那么我們在原代細胞培養(yǎng)過程中可能存在哪些問題呢?一起來學習一下吧~
污染:轉(zhuǎn)移主要組織進行培養(yǎng)時需要注意避免污染。
pH值變化:這可能是由于培養(yǎng)基中的鹽分不正確,細菌或真菌污染,碳酸氫鹽緩沖液不足,二氧化碳張力不正確等引起的。
粘附性不足(細胞不貼壁):培養(yǎng)基中不含附著因子(attachment factors)或附著因子不足,培養(yǎng)皿或培養(yǎng)基污染,細胞被yi蛋白酶過度消化等。
生長緩慢:原因包括培養(yǎng)基的pH值變化,必需的促進生長的成分/因子耗盡,低污染,試劑儲藏不當?shù)取?/span>
細胞死亡:溫度波動,二氧化碳含量過低,在融化和/或冷凍保存過程中細胞受損,有毒代謝產(chǎn)物濃度增加,培養(yǎng)基中的滲透壓失衡導(dǎo)致細胞存活率降低。
沉淀(pH不變):由于使用了冷凍培養(yǎng)基,在pH不變的培養(yǎng)基中可能會出現(xiàn)沉淀,殘留的磷酸鹽殘留在用洗滌劑洗滌時可能會沉淀出粉末狀的培養(yǎng)基成分。
細胞結(jié)塊(細胞不貼壁且結(jié)塊):懸浮細胞可能由于鈣、鎂離子的存在(貫流時應(yīng)使用不含鈣、鎂離子的D-Hank’s緩沖液(D-HBSS),而不能選擇含有鈣、鎂離子的HBSS或可能含有鈣、鎂離子的PBS緩沖液)或細胞裂解及DNA釋放(過度用蛋白水解酶消化)而結(jié)塊。
誘導(dǎo)變異性:多種試劑和培養(yǎng)基會誘導(dǎo)原代細胞的數(shù)據(jù)產(chǎn)生變異,研究者的處理手法也可能導(dǎo)致原代細胞的數(shù)據(jù)產(chǎn)生變異。
以上就是關(guān)于原代細胞培養(yǎng)過程中可能存在哪些問題的解答,如果你想了解更多請咨詢百奧創(chuàng)新客服哦~


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