流式細胞術是一種在液流系統(tǒng)中，快速測定單個細胞或細胞器的生物學性質(zhì)，并把特定的細胞或細胞器從群體中加以分類收集的技術。在細胞生物學、細胞凋亡研究和免疫學方面起著非常重要的作用。隨著流式細胞術在不斷發(fā)展，流式抗體及熒光標記產(chǎn)品的種類、數(shù)量也在不斷增多，加上多色分析實驗方案需求的增長，逐漸產(chǎn)生了抗體難選擇、熒光難搭配等問題。那么如何選擇合適的流式抗體呢？

1、抗體的選擇

流式抗體本身也是抗體，所以選擇流式抗體一定要滿足抗體選擇最基本的條件：目標蛋白特異性，反應種屬以及應用實驗。
（1）確定所需檢測的指標，目的細胞的特異性表面標記或胞內(nèi)標記；
（2）根據(jù)檢測樣本的種屬選擇抗體，流式抗體基本無法進行種屬交叉反應；
（3）根據(jù)抗體的說明，明確是否可以用于流式實驗。

2、確定儀器的參數(shù)配置

激光器：不同的流式細胞儀激光器不同，常見的有405nm，488nm和635nm，需要根據(jù)具體的儀器進行確定。
濾光片：檢測通道的多少，決定最多可以同時檢測幾個指標。熒光素的發(fā)射波長與濾光片有關，所選擇熒光素要在儀器的可檢測范圍內(nèi)。
儀器：相同的熒光在不同的儀器上檢測通道可能不同，需要參照儀器的說明。

3、流式熒光標記的選擇

如果實驗中檢測單一指標：不同熒光標記在不同的儀器上強度不同。用戶需根據(jù)檢測的目標蛋白進行具體選擇。
如果同時檢測多個指標：確認流式細胞儀能檢測多少個通道：流式抗體每個通道只能選擇1種熒光素。各個通道之間的熒光素可以隨意搭配。

4、同型對照的選擇

流式細胞實驗和其他抗體相關實驗有點不同的就是需要選擇同型對照。同型對照，是用于消除由于抗體非特異性結合到細胞表面而產(chǎn)生的背景染色，相當于實驗的陰性對照。同型對照選擇與標記抗體同種屬來源，同亞型，同熒光標記的抗體。比如：抗人的CD3的PE標記的抗體，小鼠的IgG2a。同型對照選擇PE標記的小鼠的IgG2a。
有時候同型對照的表達會比抗體的表達高，首先檢查同型對照的抗體是否加錯類型、劑量等。其次，因為有些標志在細胞的表面或者胞內(nèi)表達不高，而跟其類似的抗原非常多，那么同型對照非特異性的結合會超過抗體的特異性，所以會造成這種現(xiàn)象。這個時候推薦使用其他陰性對照，如空白對照等。

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