實時熒光定量PCR技術(shù)實驗操作步驟

來源：上海邦景實業(yè)有限公司 2025年04月27日 13:16

實時熒光定量PCR技術(shù)實驗操作步驟：

1、RNA提取：

　　針對莖環(huán)狀結(jié)構(gòu)RT引物，RNA正常提取就好;對于Oligod(T)特異的RT引物，盡量用特殊試劑盒提取miRNA。

2、反轉(zhuǎn)錄：

　　反轉(zhuǎn)錄過程對酶沒有特殊要求，操作按照反轉(zhuǎn)錄酶的說明書進行。對于引物，在反轉(zhuǎn)錄過程中只需加入Oligod(T)特異的RT引物或莖環(huán)狀結(jié)構(gòu)RT引物，不需要另外添加其他RT引物。用Oligod(T)特異的RT引物時，RNA需要進行3'Poly(A)加尾處理。

　　內(nèi)參基因不需要單獨設(shè)計RT引物，可以用熒光定量PCR的反向引物作為RT引物。

3、熒光定量PCR：

　　先優(yōu)化PCR體系(引物濃度、退火溫度等)，進行引物測試，確保擴增曲線正常且溶解曲線為單一的尖峰，陰性對照無擴增，則引物測試合格，再進行后續(xù)實驗(常規(guī)操作)。

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實時熒光定量PCR技術(shù)實驗操作步驟

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