為了避免戴安高效液相色譜儀的常見操作失誤，操作人員需要遵循一系列規(guī)范的操作步驟和維護措施。以下是一些具體的建議：
一、流動相的處理
1.過濾：應(yīng)預(yù)先除去流動相中的任何固體微粒，可采用Millipore濾膜（0.2μm或0.45μm）等濾器進行過濾。泵的入口都應(yīng)連接砂濾棒（或片），輸液泵的濾器應(yīng)經(jīng)常清洗或更換。
2.脫氣：防止流動相中的氣泡對系統(tǒng)造成不良影響，確保流動相的穩(wěn)定性。
二、泵的維護
1.及時清洗：在停泵過夜或更長時間的情況下，必須泵入純水將泵充分清洗后，再換成適合于色譜柱保存和有利于泵維護的溶劑（對于反相鍵合硅膠固定相，可以是甲醇或甲醇-水）。流動相不應(yīng)含有任何腐蝕性物質(zhì)，含有緩沖液的流動相不應(yīng)保留在泵內(nèi)。
2.防止空轉(zhuǎn)：泵工作時要留心防止溶劑瓶內(nèi)的流動相被用完，避免空泵運轉(zhuǎn)磨損柱塞、缸體或密封環(huán)。
三、梯度洗脫的注意事項
1.溶劑互溶性：注意溶劑的互溶性，不相混溶的溶劑不能用作梯度洗脫的流動相。有些溶劑在一定比例內(nèi)混溶，超出范圍后就不互溶，使用時更要引起注意。當(dāng)有機溶劑和緩沖液混合時，還可能析出鹽的晶體，尤其使用磷酸鹽時需特別小心。
2.空白梯度洗脫：進行樣品分析前必須進行空白梯度洗脫，以辨認(rèn)溶劑雜質(zhì)峰。
3.粘度變化：混合溶劑的粘度常隨組成而變化，在梯度洗脫時需注意壓力的變化，防止超過輸液泵或色譜柱能承受的最大壓力。
四、六通閥的使用和維護
1.樣品過濾：樣品溶液進樣前必須用0.45μm濾膜過濾，以減少微粒對進樣閥的磨損。
2.閥芯轉(zhuǎn)動：轉(zhuǎn)動閥芯時不能太慢，更不能停留在中間位置，防止流動相受阻、泵內(nèi)壓力劇增甚至損壞柱頭。
3.沖洗進樣閥：為防止緩沖鹽和樣品殘留在進樣閥中，每次分析結(jié)束后應(yīng)沖洗進樣閥。
五、色譜柱的使用和維護
1.避免反沖：色譜柱一般不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。
2.預(yù)柱和保護柱：選擇使用適宜的流動相（尤其是pH值），以避免固定相被破壞。可以在進樣器前面連接一預(yù)柱或保護柱，以保護分析柱。
3.調(diào)節(jié)流速：調(diào)節(jié)流速時應(yīng)緩慢進行，避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動。
六、儀器的校準(zhǔn)和日常維護
1.定期校準(zhǔn)：為了確保戴安高效液相色譜儀的穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性，應(yīng)定期進行儀器校準(zhǔn)，確保各項參數(shù)在規(guī)定范圍內(nèi)。
2.日常維護：包括流動相的過濾、脫氣、泵密封墊的清洗、系統(tǒng)管路的清洗等，應(yīng)堅持進行，以防止色譜柱堵塞、系統(tǒng)壓力過大、色譜峰異常等故障的發(fā)生。
七、樣品制備的注意事項
1.濃度：樣品的濃度應(yīng)適中，避免過高或過低影響分離效果。
2.溶劑：應(yīng)使用與液相色譜儀兼容的溶劑進行樣品溶解和稀釋。
3.過濾：樣品溶液應(yīng)經(jīng)過適當(dāng)?shù)倪^濾處理，以去除可能影響分離效果的雜質(zhì)。
避免戴安高效液相色譜儀的常見操作失誤需要從流動相處理、泵維護、梯度洗脫、六通閥使用和維護、色譜柱使用和維護、儀器校準(zhǔn)和日常維護以及樣品制備等多個方面入手。操作人員應(yīng)嚴(yán)格遵循操作規(guī)程和保養(yǎng)要求，確保實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和儀器的長期穩(wěn)定運行。
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