TU-1810SPC紫外/可見分光光度計使用心得
TU-1810SPC紫外可見分光光度計是北京普析通用儀器有限責(zé)任公司生產(chǎn)的產(chǎn)品，可獨立完成光度測量、定量測定、光譜掃描、時間掃描、DNA/蛋白質(zhì)測量及三維圖譜分析等功能，其波長范圍為190-1100 nm，光譜帶寬：0.5、1、2、5 nm(四檔可變狹縫)，波長準(zhǔn)確度：±0.3 nm，光度范圍：-0.3～3.0Abs，光度準(zhǔn)確度：±0.002 Abs(0～0.5 Abs)，該款分光光度計具有出色的技術(shù)指標(biāo)及穩(wěn)定可靠的工作特性，流暢的人機對話操作(測定結(jié)果穩(wěn)定可靠，操作簡便)，可滿足用戶各種分析工作的需求諸如光度測量、光譜掃描、時間掃描及三維圖譜分析等，且售后服務(wù)良好，深受廣大分析工作者的喜愛，在基層實驗室有廣泛的裝備應(yīng)用。本實驗室在2005年裝備了該款分光光度計，主要用于光度測量、定量測定、光譜掃描、時間掃描，現(xiàn)就光譜掃描、時間掃描應(yīng)用情況談幾點體會。
光譜掃描:主要是為了測量某物質(zhì)的吸收光譜曲線以獲得該物質(zhì)的最大吸收波長(λmax)，這對于沒有光譜掃描功能的光度計而言則是比較麻煩且費時的，特別是對于穩(wěn)定性較差的物質(zhì)要想獲得準(zhǔn)確的λmax還是比較困難的，但對于有光譜掃描功能的光度計而是非常容易的，所以應(yīng)用好儀器的光譜掃描功能，可以很方便測定出某物質(zhì)的吸收光譜曲線，而后通過峰值檢出來確定該物質(zhì)的λmax并用于該物質(zhì)的光度測定。
進行光譜掃描時，首先是要確定掃描的波長范圍即起始和終止波長，一般可根據(jù)待掃描物質(zhì)的性質(zhì)如顏色等大致確定其λmax，如紅色物質(zhì)其λmax位于500 nm左右，那么其光譜掃描的波長范圍可選擇400～600 nm，例如：鹽酸氯丙嗪可氧化成紅色化合物，經(jīng)對350～600 nm波長范圍掃描確定其λmax位于525 nm波長處，試劑空白的λmax位于360 nm波長處。
而對于藍(lán)色物質(zhì)其λmax位于600 nm左右，那么其光譜掃描的波長范圍可選擇500～700 nm，例如：藍(lán)色的鐵(Ⅱ)-硫代紫尿酸配合物，經(jīng)對300～800 nm波長范圍掃描確定其具有兩個吸收峰分別位于658 nm和384nm波長處。具體掃描時先可以選擇一個大致的波長范圍進行掃描，再根據(jù)情況進行適當(dāng)調(diào)整，以便獲得合適的掃描光譜圖。
其次是要確定合適的掃描波長間隔，可根據(jù)不同的精度要求選擇不同的掃描波長間隔，對λmax數(shù)據(jù)精度要求較高時可選擇較小的掃描波長間隔如0.2nm，反之可選擇較大的掃描波長間隔如0.5nm或者1nm甚至更大?？傊x擇合適的掃描波長間隔以獲得準(zhǔn)確的λmax數(shù)據(jù)。
第三是要確定適宜的掃描速度，對于穩(wěn)定性好的物質(zhì)可采用慢速和中速掃描，反之對于穩(wěn)定性差的物質(zhì)可采用快速掃描，這樣可獲得準(zhǔn)確的光譜曲線及λmax數(shù)據(jù)。
第四是要確定適宜的吸光度范圍(掃描光譜圖縱坐標(biāo))范圍，以便顯示掃描光譜圖的全貌。如圖1、圖2的吸光度范圍分別為0～3.5和0～2.0，對于有負(fù)吸光度的可以從負(fù)數(shù)開始，一切以能顯示掃描光譜圖的全貌為目的。
2、時間掃描：一是為了監(jiān)測某化學(xué)反應(yīng)的吸光度隨時間變化的曲線以獲得該化學(xué)反應(yīng)達(dá)到的最大反應(yīng)速率(吸收度)的時間。該功能特別適用于動力學(xué)光度法中反應(yīng)平臺區(qū)的確定。二是可以觀察某物質(zhì)吸光度隨時間變化的曲線，以監(jiān)測該物質(zhì)的穩(wěn)定性。如CN-與異煙酸-硫代巴比妥酸反應(yīng)首先形成紅色染料，然后逐漸變成藍(lán)色，其吸光度A525先是快速上升達(dá)到穩(wěn)定最大值然后很快下降，而A642上升及下降的速度均較緩慢，但室溫下體系在525nm和642nm吸光度分別在2min和35min左右可達(dá)最大值且分別在2～3min和15～20min內(nèi)基本穩(wěn)定。
時間掃描時先要確定掃描波長即光度測量波長，一般為物質(zhì)的最大吸收波長；其次要確定掃描時長，以獲得化學(xué)反應(yīng)的吸光度隨時間變化的趨勢，或物質(zhì)吸光度隨時間變化的趨勢，以提示物質(zhì)的穩(wěn)定性數(shù)據(jù)。
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