在實驗操作過程中，需特別注意以下幾點以確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和實驗安全：

1. 樣本處理規(guī)范

血清或血漿樣本需避免反復(fù)凍融，離心后取上清液時應(yīng)防止溶血或脂血干擾。若樣本存在沉淀物，需二次離心（3000rpm，10分鐘）后使用。采集后的樣本若不能立即檢測，應(yīng)分裝保存于-20℃以下，避免反復(fù)凍融導(dǎo)致抗體效價下降。

2. 試劑平衡與質(zhì)量控制

所有試劑使用前需室溫平衡30分鐘，搖勻后垂直滴加，避免產(chǎn)生氣泡。每批次實驗必須設(shè)置質(zhì)控品（陽性/陰性/臨界值），若質(zhì)控結(jié)果異常需終止實驗并排查原因（如試劑失效、溫育時間不足等）。開封后的微孔板應(yīng)密封保存于2-8℃，濕度低于60%的環(huán)境。

3. 溫育條件優(yōu)化

使用恒溫箱時需校準(zhǔn)溫度（37±1℃），建議預(yù)實驗驗證溫育時間。避免疊放反應(yīng)板導(dǎo)致受熱不均，推薦使用震蕩模式（500-700rpm）以增強抗原抗體結(jié)合效率。顯色階段需嚴格避光，終止反應(yīng)后10分鐘內(nèi)完成OD值測定。

4. 交叉污染防范

不同樣本需更換吸頭，洗板時確保每孔注滿洗滌液（350μL/孔），浸泡30秒后拍干。建議使用多通道移液器提高洗板一致性。酶標(biāo)儀讀數(shù)前需用無塵布擦拭板底，避免指紋或液體殘留影響光路。

5. 結(jié)果判讀要點

臨界值（Cut-off）=陰性對照均值+0.15，樣本OD值≥1.1倍臨界值判為陽性。對于灰區(qū)樣本（0.9-1.1倍臨界值），建議72小時后復(fù)測或送PCR確認。實驗記錄需包含原始OD值、計算過程及環(huán)境溫濕度數(shù)據(jù)。