乳制品三聚氰胺檢測(cè)液相色譜儀測(cè)定
1. 乳制品三聚氰胺檢測(cè)液相色譜儀 原理
試樣經(jīng)溶解、超聲提取、沉淀蛋白、過濾得到測(cè)試液，經(jīng)高效液相色譜測(cè)定，根據(jù)保留時(shí)間和紫外吸收光譜定性，根據(jù)峰面積進(jìn)行定量。
2 試劑
方法中所用試劑，除另有規(guī)定外，均為分析純?cè)噭疄镚B/T 6682-2008中一級(jí)用水，溶液為水溶液。
2.1 磺基水楊酸。
2.2 檸檬酸。
2.3 辛烷磺酸鈉：高效液相色譜離子對(duì)試劑。
2.4 乙腈：色譜純。
2.5 鹽酸。
2.6 60 g/L磺基水楊酸：稱取60 g磺基水楊酸用水定容至1 L。
2.7 0.1 mol/L鹽酸：量取8.3 mL鹽酸用水稀釋至1 L。
2.8 緩沖液：檸檬酸和辛烷磺酸鈉濃度均為10 mmol/L。
2.9 三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品：已知含量大于99%。
2.10 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：稱取三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品0.01g（準(zhǔn)確至0.0 001g），用甲醇配制成濃度為1mg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。
2.11 標(biāo)準(zhǔn)系列：將標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液用0.1 mol/L鹽酸逐級(jí)稀釋至0.25µg/mL，0.50µg/mL，1.00 µg/mL，2.00 µg/mL，4.00 µg/mL，5.00 µg/mL，10.0 µg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。
3 儀器
3.1 高效液相色譜，附二極管陣列檢測(cè)器或紫外檢測(cè)器。
3.2 天平：感量0.01 g。
3.3 分析天平：感量0.0 001 g。
3.4 高速離心機(jī)：轉(zhuǎn)速>4 000 r/min。
3.5 *。
3.6 旋渦混勻器。
4 樣品處理
4.1 固態(tài)乳制品
稱取1.0 g左右試樣（準(zhǔn)確至0.0 001 g），加入0.1 mol/L 鹽酸約15 mL，渦旋混勻，超聲提取30 min后加入60 g/L磺基水楊酸6 mL ~8 mL，用0.1 mol/L 鹽酸定容至25 mL，混勻后離心，上清液經(jīng)0.45 µm的微孔濾膜過濾后進(jìn)樣。
4.2 液態(tài)乳制品（包含酸奶）
稱取15 g左右試樣（準(zhǔn)確至0.0 001 g），加入60 g/L磺基水楊酸3 mL~4 mL，用0.1 mol/L 鹽酸定容至25 mL，混勻后離心，上清液經(jīng)0.45 µm的微孔濾膜過濾后進(jìn)樣。
4.3 飼料
稱取1.0g左右試樣（準(zhǔn)確至0.0 001 g），將樣品用研缽充分碾碎混勻，加入0.1 mol/L 鹽酸約15 mL，渦旋混勻，超聲提取30 min后加入60 g/L磺基水楊酸6 mL ~8 mL，用0.1 mol/L 鹽酸定容至25 mL，混勻后離心，上清液經(jīng)0.45 µm的微孔濾膜過濾后進(jìn)樣。
5 測(cè)定步驟
5.1 色譜條件
5.1.1 色譜柱：ODS或C8，250 mm×4.6 mm，5 µm。
5.1.2 流動(dòng)相：緩沖液︰乙腈=85︰15。
5.1.3 流速：1.0 mL/min。
5.1.4 柱溫：40 ℃。
5.1.5 波長(zhǎng)：240 nm。
上述色譜條件是典型的，可根據(jù)實(shí)際情況做具體調(diào)整。如果分離效果不理想，將水相改為：檸檬酸和辛烷磺酸鈉濃度均為10 mmol/L，配制成1000mL溶液，流動(dòng)相用氨水調(diào)PH值3.9到3.95。
5.2 測(cè)定
5.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備
將標(biāo)準(zhǔn)系列0.25µg/mL，0.50µg/mL，1.00 µg/mL，2.00 µg/mL，4.00 µg/mL，5.00 µg/mL，10.0 µg/mL分別進(jìn)樣20 µL,以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)作圖，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。
