ATCC細(xì)胞培養(yǎng)基中丙酮酸鈉的作用是什么？
答：丙酮酸鈉可以作為細(xì)胞培養(yǎng)中的替代碳源，盡管細(xì)胞更傾向于以葡萄糖作為碳源，但是，如果
沒(méi)有葡萄糖的話，細(xì)胞也可以代謝丙酮酸鈉。
倒置相差顯微鏡
倒置顯微鏡一般構(gòu)造與普通顯微鏡一樣有物鏡目鏡光源光路系統(tǒng)等。但倒置顯微鏡的光源位于在載物臺(tái)上放，光線由上至下照射到觀察物上，物鏡則位于載物臺(tái)下方，觀察培養(yǎng)細(xì)胞多用放大倍數(shù)為 10×和 20×的物鏡，目鏡為 10×。
Ø 擦拭鏡頭可用沾酒精/乙混合液或二甲苯的鏡頭紙或脫脂棉。
Ø 擦拭涂漆表面，可用紗布除去灰塵。若有油漬污垢，用紗布沾少許汽油去除，不能用有機(jī)溶劑
（如：酒精乙和其它稀釋劑）擦拭涂漆表面和塑料部件。
Ø 儀器不使用時(shí)，用有機(jī)玻璃或聚乙烯罩上，并存放于干燥且沒(méi)有霉菌滋生的地方。
Ø 物鏡和目鏡放在有干燥劑的密閉容器中。
1、我把細(xì)胞從-80度的冰箱拿出來(lái)復(fù)蘇，期間沒(méi)有污染，放二氧化碳孵箱后*天在顯微鏡下看，發(fā)現(xiàn)很多漂浮的死細(xì)胞，貼壁的細(xì)胞很少，但培養(yǎng)液是清亮、桃紅色的，液面上可見漂浮著很多死細(xì)胞（我用的是DMEM+10%胎牛血清的培養(yǎng)液）；我又把它放回孵箱；第二天看，和*天一樣，我就換液了；第三天看，鏡下基本未見什么細(xì)胞了。之前師兄給我說(shuō)這種細(xì)胞長(zhǎng)得慢（甲狀腺癌K1細(xì)胞），但是不至于不長(zhǎng)，說(shuō)明沒(méi)有復(fù)蘇成功。
可能的原因有：
a.   -80度凍存細(xì)胞的時(shí)間太長(zhǎng)，一般如果需要長(zhǎng)期保存的話，超過(guò)一個(gè)月。轉(zhuǎn)入液氮。
原有的凍存細(xì)胞狀態(tài)就不好，表現(xiàn)為細(xì)胞活力不夠，細(xì)胞密度不高。
換液太快，培養(yǎng)體系太大，如果ATCC細(xì)胞狀態(tài)不好，保持較小的培養(yǎng)容積，以獲得較高的細(xì)胞密度。如果培養(yǎng)基還是桃紅色，說(shuō)明細(xì)胞的代謝活動(dòng)很弱，此時(shí)不宜換液。不知道你這個(gè)細(xì)胞是喜歡聚集生長(zhǎng)還是離散生長(zhǎng)。根據(jù)條件調(diào)節(jié)。比如，如果喜歡聚堆長(zhǎng)，建議先傾斜培養(yǎng)瓶/皿，2h為一個(gè)時(shí)間間隔，觀察細(xì)胞狀態(tài)，以作調(diào)整。
b.  估計(jì)是細(xì)胞在凍存時(shí)消化過(guò)度，導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)不好。
如果*天能見到貼壁的話,說(shuō)明還是可以的.有時(shí)候培養(yǎng)基顏色偏紫,細(xì)胞貼壁會(huì)有問(wèn)題的.你核實(shí)一下你培養(yǎng)基顏色是否偏堿.如果偏堿,可以適當(dāng)調(diào)高培養(yǎng)箱二氧化碳的濃度.或者換新的培養(yǎng)基.特別是開啟過(guò)的培養(yǎng)基,適用時(shí)間長(zhǎng)容易出現(xiàn)這個(gè)問(wèn)題.
c.  我也遇到以上情況，根據(jù)經(jīng)驗(yàn)很多次像這樣的情況都是細(xì)胞凍存過(guò)程出了問(wèn)題，另外復(fù)蘇細(xì)胞溶解要迅速，我們有時(shí)候水浴鍋刀38度，甚至40度，目的是讓其快速解凍，而且復(fù)蘇*次的培液血清濃度可以相對(duì)我高一點(diǎn)，等ATCC細(xì)胞第二次換液時(shí)換回10%。