原代細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融，實(shí)驗(yàn)證明這樣可以Z大限度的保存細(xì)胞活力。目前細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護(hù)劑，這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性，加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法，這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時(shí)間內(nèi)即融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對(duì)細(xì)胞造成損傷。
細(xì)胞凍存是細(xì)胞培養(yǎng)、引種、保種和保證實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行的重要技術(shù)手段。在細(xì)胞建株和建系中，及時(shí)凍存原始細(xì)胞是十分重要的。在雜交瘤單克隆抗體的制備過(guò)程中，雜交瘤細(xì)胞、每次克隆化得到的亞克隆細(xì)胞的凍存保種常常是*的實(shí)驗(yàn)操作。因?yàn)樵跊](méi)有建立一個(gè)穩(wěn)定的細(xì)胞系或穩(wěn)定分泌抗體的細(xì)胞系的時(shí)候，細(xì)胞的培養(yǎng)過(guò)程中隨時(shí)可能因細(xì)胞的污染、分泌抗體能力的喪失或遺傳變異等導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗，如果沒(méi)有原始細(xì)胞的凍存，則因?yàn)樯鲜龅囊馔舛肮ΡM棄。
1常用凍存液組成成分
20％血清（FBS）、10％DMSO、70％1640培養(yǎng)液；或90％血清（FBS）、10％DMSO，更可防止細(xì)胞內(nèi)冰晶形成。將DMSO和FBS加入DMEM中，各自含量占總體積的10%，然后濾膜過(guò)濾后分裝保存?zhèn)溆谩?br />2DMSO在凍存液中的作用
DMSO在4℃時(shí)對(duì)細(xì)胞無(wú)明顯毒性，分子量小、溶解度大、易透過(guò)細(xì)胞膜，降低細(xì)胞外未結(jié)冰溶液中溶質(zhì)濃度，使細(xì)胞免受高濃度溶質(zhì)的損傷,細(xì)胞內(nèi)水分也不會(huì)過(guò)分外滲，避免了細(xì)胞過(guò)分脫水皺縮；DMSO與水分子結(jié)合，可使冰點(diǎn)下降，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少冰晶損傷。
3原代細(xì)胞注意事項(xiàng)     
  1.DMSO 不用高壓滅菌；DMEM不能高溫高壓滅菌，可以過(guò)濾除菌。
  2.DMSO要用新的，而且要避光保存。
  3.DMSO：含10%FBS的DMEM=1:9(體積比)。
容量：        500KU    shēng huà shì jì        依來(lái)鉻氰藍(lán)R
容量：    RT    25克    shēng huà shì jì        衣康酸
容量：    RT，避光    5克    shēng huà shì jì        伊文斯藍(lán)
容量：        10片/箱    shēng huà shì jì        伊紅染液
容量：        1米    shēng huà shì jì        伊紅美蘭瓊脂平板
容量：        250克    shēng huà shì jì        伊紅美蘭瓊脂
容量：        25克    shēng huà shì jì        一氧化錫
容量：        25克    shēng huà shì jì        一氧化硅
容量：    RT    500支/包    shēng huà shì jì        一氧化氮合成酶測(cè)試盒[測(cè)總NOS（T-NOS）]
容量：    RT    50塊/盒    shēng huà shì jì        一氧化氮合成酶測(cè)試盒（測(cè)T-NOS、INOS、CNOS三型同時(shí)
容量：        10塊/包    shēng huà shì jì        一氧化氮測(cè)試盒（還原酶法）
原代細(xì)胞