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原代細胞培養(yǎng)液的主要成份是什么?

時間:2018-4-16閱讀:99
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實驗室常用的原代細胞培養(yǎng)液的主要成分是氨基酸、葡萄糖、無機鹽、維生素和微量元素等。為了維持穩(wěn)定的pH,培養(yǎng)液中一般有一個pH緩沖系統(tǒng),同時常加入少量的酚紅作為pH指示劑。另外培養(yǎng)液中一般需要加入一定量的血清。
    在細胞沉淀中加入0.5-1ml的PBS (等滲), 輕輕顛倒混勻,將培養(yǎng)液在室溫條件下1000轉/分,離心10分鐘,棄上清留細胞沉淀。
重復上述操作反復洗滌1~2次。
3、勻漿的方式:手工勻漿,超聲破碎,裂解液裂解,反復凍融。
① 手工勻漿:在細胞沉淀中加入一定量的PBS(PBS的加入量根據(jù)所測指標的不同而有所改變,一般加入0.5ml,細胞密度不小于一百萬個/ml),混勻,將細胞懸浮于PBS中,用移液器將細胞懸浮液移至玻璃勻漿管中(2ml玻璃勻漿管),將玻璃勻漿管置于冰水混合物中,手動勻漿3分鐘,然后取破碎好的細胞懸浮液進行測定。
② 超聲破碎:
在細胞沉淀中加入一定量的PBS(PBS的加入量根據(jù)所測指標的不同而有所改變,一般加入0.5ml,細胞密度不小于一百萬個/ml),混勻,將細胞懸浮于PBS中,在冰水浴條件下進行如下操作:
     a、用超聲粉碎機進行粉碎,可用Soniprep150型超聲波發(fā)生器以振幅14微米超聲處理30秒使細胞破碎,也可用國產超聲波發(fā)生儀,用400安培,5秒/次,間隙10秒反復3~5次。
      b、用超聲細胞破碎儀,300W功率,每次超聲3~5秒,間隔30秒,重復4~5次。
    一般培養(yǎng)液都含酚紅作為pH指示劑,它是細胞培養(yǎng)液狀態(tài)的一個很好的標志。過長時間的培養(yǎng)或者微生物的污染都會使培養(yǎng)液的pH發(fā)生改變。需要注意的是,酚紅可以模擬類固醇激素(尤其是雌性激素)的作用,所以如果培養(yǎng)的原代細胞對雌性激素敏感(比如實驗本身就是研究雌性激素對細胞的作用),就應當使用沒有酚紅的培養(yǎng)液。
100275-200702    含量測定    100mg    鹽酸丙卡特羅
100276-199801    檢查用    50mg    氨魯米特
100277-200702    含量測定    200mg    大豆油   
100278-200402    含量測定    50mg    對羥基苯甲酸甲酯
100279-200502    含量測定    100mg    泛酸鈉
100280-201002    含量測定    100mg    格列喹酮
100281-200602    含量測定    100mg    格列吡嗪
100283-        100mg    核黃素磷酸鈉
100284-200602     含量測定    100mg    吉非羅齊
100287-200701    含量測定    100mg    麥芽糖
100288-200201    含量測定    50mg    尿素
原代細胞

 

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