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當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細(xì)胞培養(yǎng)>>原代細(xì)胞>> T25m2人神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞操作
我公司提供原代細(xì)胞、細(xì)胞系、細(xì)胞株和菌種,細(xì)胞庫管理規(guī)范,提供的細(xì)胞株背景清楚,提供參考文獻(xiàn)和*培養(yǎng)條件。純度可達(dá) 90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、 HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
人神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞操作 | T25m2 | CS-963760 |
人神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞【Human Brain: Normal Nerve Microglia】產(chǎn)品描述:提供的原代細(xì)胞均來自新鮮組織,用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)國際標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細(xì)胞生長條件,以降低雜細(xì)胞的污染,同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下,原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài),進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項(xiàng)目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。提供的細(xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程,保證細(xì)胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項(xiàng);3、售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。
保存和應(yīng)用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞,如是新鮮原代細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)操作。如是凍存細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研,不得用于臨床應(yīng)用。
細(xì)胞處理:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1.棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
細(xì)胞處理方法:
以下細(xì)胞處理方法及細(xì)胞說明書僅供參考,具體操作還需要根據(jù)到貨時(shí)細(xì)胞密度,細(xì)胞生長狀態(tài)等具體情況,酌情處理,如需要更詳細(xì)技術(shù)指導(dǎo),請(qǐng)及時(shí)電話或郵件聯(lián)系。
一.貼壁細(xì)胞
客戶接收到細(xì)胞,用75%的酒精消毒(建議配制75%酒精的水是滅菌過的)培養(yǎng)瓶外部。
肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X ,200X 各一張)。
顯微鏡觀察細(xì)胞,當(dāng)細(xì)胞融匯至80%左右(可以傳代的情況下),細(xì)胞應(yīng)該在37度培養(yǎng)箱預(yù)溫1-2h后再做處理。如未達(dá)到細(xì)胞傳代密度,培養(yǎng)瓶應(yīng)預(yù)留一部分培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
嚴(yán)格無菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞)。
用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面,加入適量的0.05%胰酶-EDTA消化細(xì)胞,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落,加入終止液終止。
1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2 培養(yǎng)。
二.懸浮細(xì)胞
1. 接收到細(xì)胞,用75%的酒精消毒(建議配制75%酒精的水是滅菌過的)培養(yǎng)瓶外部。
2. 肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X ,200X 各一張)。
3. 嚴(yán)格無菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4. 將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒)。
5. 1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。 換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和新鮮培養(yǎng)基,37℃,5%CO2 培養(yǎng)RabbitAngiopoietin2,ANG-2ELISA試劑盒兔血管生成素2(ANG-2)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 去氧地膽草素 HPLC≥98% 5mg
RabbitangiotensionⅡ,ANG-ⅡELISA試劑盒兔血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 去氧鬼臼,去氧鬼臼脂素 HPLC≥98% 5mg
rabbitansformingGrowthfactorβ1,TGF-β1兔子轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 去氧拉巴醌 HPLC≥98% 5mg
Rabbitansforminggrowthfactorβ2,TGFβ2兔轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGFβ2)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 全草含茜草萜酸 HPLC≥98% 5mg
RabbitApolipoproteinE,Apo-EELISA試劑盒兔載脂蛋白E(Apo-E)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 雀舌黃楊堿B HPLC≥98% 5mg
RabbitapoproteinA1,apo-A1ELISA試劑盒兔載脂蛋白A1(apo-A1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 肉桂酸肉桂醇酯 HPLC≥98% 5mg
RabbitapoproteinB100,apo-B100ELISA試劑盒兔載脂蛋白B100(apo-B100)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 軟木花椒素 HPLC≥98% 5mg
rabbitbasicfibroblastgrowthfactor,bFGFELISA試劑盒兔子堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 軟脂酸β香樹精酯 HPLC≥98% 5mg
RabbitB-cellleukemia/lymphoma2,Bcl-2ELISA試劑盒兔子B細(xì)胞瘤因子2(Bcl-2)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 軟脂酸谷甾醇酯 HPLC≥98% 5mg
RabbitBcl-2AssaciatedXprotein,BAXELISA試劑盒兔Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 蕊木堿甲酯 HPLC≥98% 5mg
兔Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX)ELISA檢測試劑盒RabbitBcl-2AssaciatedXprotein,BAXELISAKit 96T/48T 鹽酸多佐胺;鹽酸杜塞酰胺 Dorzolamide HCl 質(zhì)量規(guī)格:>99%,USP31
牛固酮(ALD)試劑盒 Bovine aldosterone,ALD ELISA kit 鹽酸多佐胺;鹽酸杜塞酰胺(標(biāo)準(zhǔn)品) Dorzolamide HCl 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
英文名稱HumanMaixmetalloproteinase-8—MMP-8ELISAkit人基質(zhì)金屬蛋白酶8(MMP-8)規(guī)格:96T/48T 甲磺酸多沙唑嗪 Doxazosin Mesylate 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
動(dòng)物內(nèi)皮細(xì)胞分離培養(yǎng)試劑盒10 甲磺酸多沙唑嗪(標(biāo)準(zhǔn)品) Doxazosin Mesylate 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
RatProinsulin,PIELISA試劑盒大鼠胰島素原(PI)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 鹽酸多柔比星/鹽酸阿霉素 Doxorubicin HCl/Adriamycin 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
小鼠透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白(HABP)ELISA試劑盒 ,英文名: HABP ELISA Kit 鹽酸多柔比星/鹽酸阿霉素(標(biāo)準(zhǔn)品) Doxorubicin HCl/Adriamycin 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
小鼠胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白3(IGFBP-3)ELISA檢測試劑盒MouseInsulin-likegrowthfactorbindingprotein3,IGFBP-3ELISAKIT 96T/48T 鹽酸強(qiáng)力霉素/鹽酸多西環(huán)素 Doxycycline HCl 質(zhì)量規(guī)格:>97%,BR
人胱天蛋白酶10(P10)試劑盒 Human P10 ELISA Kit 鹽酸強(qiáng)力霉素/鹽酸多西環(huán)素(標(biāo)準(zhǔn)品) Doxycycline HCl 質(zhì)量規(guī)格:含量測定
RatEsogeeceptor,ERELISAKit大鼠雌激素受體(ER)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 維生素K3,甲萘醌 Menadione 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
6-OH-MTHβC高效液相色譜電化學(xué)定量檢測試劑盒20 維生素K3,甲萘醌(標(biāo)準(zhǔn)品) Menadione 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品
人神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞操作RatovalbuminspecificIgE,OVAsIgEELISA試劑盒大鼠卵清蛋白特異性IgE(OVAsIgE)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 炔諾酮(標(biāo)準(zhǔn)品) Norethindrone 質(zhì)量規(guī)格:>97%,標(biāo)準(zhǔn)品
Ratovariancancermarker-CA125ELISAKit大鼠卵巢癌標(biāo)志物CA125ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 炔諾酮 Norethindrone 質(zhì)量規(guī)格:>97%
Ratovariancancermarker-CA125ELISA試劑盒大鼠卵巢癌標(biāo)志物CA125ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 炔雌醚;炔雌醇環(huán)戊醚 Quinestrol 質(zhì)量規(guī)格:USP
Ratoxidizedlowdensitylipoprotein,OxLDLELISAKit大鼠氧化低密度脂蛋白(OxLDL)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 炔雌醇3-硫酸鹽 Ethynyl Estradiol 3-Sulfate 質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
Ratoxidizedlowdensitylipoprotein,OxLDLELISA試劑盒大鼠氧化低密度脂蛋白(OxLDL)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 炔雌醇3-醋酸鹽 Ethynyl Estradiol 3-Acetate 質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
Ratoxidizedlowdensitylipoproteinaibody,OLAbELISAKit大鼠氧化低密度脂蛋白抗體(OLAb)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 炔雌醇-2,4,16,16-d4 Ethynyl Estradiol-2,4,16,16-d4 質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
Ratoxidizedlowdensitylipoproteinaibody,OLAbELISA試劑盒大鼠氧化低密度脂蛋白抗體(OLAb)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 炔雌醇17-β-D-葡萄糖苷酸 Ethynyl Estradiol 17-β-D-Glucuronide 質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
Ratp53/tumorprotein,p53/TP53ELISAKit大鼠P53(P53)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 炔雌醇(標(biāo)準(zhǔn)品) Ethiny Estradiol 質(zhì)量規(guī)格:>98%標(biāo)準(zhǔn)品
Ratp53/tumorprotein,p53/TP53ELISA試劑盒大鼠P53(P53)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 炔雌醇 3-β-D-葡萄糖苷酸 Ethynyl Estradiol 3-β-D-Glucuronide 質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
RatParathyroidhormone,PTHELISAKit大鼠甲狀旁腺激素(PTH)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 炔雌醇 Ethiny Estradiol 質(zhì)量規(guī)格:>98%,可用于細(xì)胞培養(yǎng)
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí),應(yīng)將細(xì)胞收集,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,少量保存上清液(防止細(xì)胞吸走),加入部分新鮮培養(yǎng)基,吹打均勻后,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO搖勻后進(jìn)行凍存。
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