?樣品要求及注意事項：
1、 如果提供實驗材料，實驗材料必須保證新鮮，請您采樣后立刻放入液氮中速凍或加入樣穩(wěn)定劑，并用干冰運輸。
2、 如果樣品可以用Trigol法提總RNA ，也可以將樣品研磨后放在 Trigol中，動植物組織 ： 50～100mg/mlTrigol，貼壁細胞：10cm2/mlTrigol，懸浮細胞：5×106動植物，酵母細胞或細菌細胞10×107/mlTrigol。
3、 如果提供RNA或cDNA我們要對您提供的材料進行評估。
4、 實時熒光定量PCR服務(wù)您一定要提供樣品及要擴增基因的詳細信息。

壞死梭桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒運輸及保存：低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。使用本試劑盒提供的陽性對照時，由于其濃度較高，一定要注意不要污染其他試劑和成分。在專門的區(qū)域操作。

儲存條件：
14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，產(chǎn)品僅用于科研請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
相對定量簡介：
分析方法： ①雙標曲法 ②2 － △Ct ③2 － △△Ct ④Pfaffi法
①雙標準曲線法簡介
公式：
優(yōu)點：分析簡單，實驗優(yōu)化簡單
缺點：對每一個基因，每一輪實驗都必需做標準曲線；必需有固定的標準品做標準曲線；這些標準品并不代表樣品擴增的真實狀態(tài)應(yīng)用：基因表達調(diào)控研究中與*的兩種相對定量方法之一

實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。
其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。
步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。

Potassium tetraoxalate dihydrate四二2.5升CP，

Potassium lurite碲(IV)100克色譜標準品，99%

Potassium tartrate hemihydrate酒石二半水合物50克CP，

Potassium Sulfide無水化10克BR

Potassium stearate十八1升CP，

Potassium sorbate2，4-己二1公斤BR

Potassium sodium tartrate tetrahydrate洛瑟爾氏鹽500毫克CP，

Potassium silicate偏硅1克GR，99%

Potassium pyruvate25克BR

Potassium pyrophosphate焦磷四1克生物技術(shù)級，

Potassium pyroantimonate銻(V)500克AR，

Potassium platinic chloride化鉑1克色譜標準品，99.5%

Potassium phosphate monobasic一鹽基磷1克AR，99%

Potassium phosphate dibasic無水磷二10克CP，

Potassium oxonate1,4,5,6-四-4,6-二氧-1,3,5-三-2-羧1克USP級，900mcg/mg

絡(luò)緦  英文名稱：Rosin  號：85026-55-7  規(guī)格：10mg

絡(luò)塞定  英文名稱：Rosiridin  號：100462-37-1  規(guī)格：10mg

絡(luò)塞維  英文名稱：Rosavin  號：84954-92-7  規(guī)格：20mg

 酪醇  英文名稱：4-Hydroxyphenethyl alcohol   號：501-94-0  規(guī)格：20mg

紅景天苷  英文名稱：10338-51-9  號：10338-51-9  規(guī)格：20mg

荷葉堿  英文名稱：Nuciferine  號：475-83-2  規(guī)格：20mg

葒草苷  英文名稱：Orientin  號：28608-75-5  規(guī)格：20mg

異葒草素  英文名稱：Homoorientin  號：4261-42-1   規(guī)格：20mg

葫蘆素B  英文名稱：cucurbitacin B  號：6199-67-3  規(guī)格：20mg

葫蘆素 E   英文名稱：cucurbitacin E  號：18444-66-1  規(guī)格：10mg
壞死梭桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒4,4'-Diaminodiphenylsulfone　氨苯砜(標準品)　規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

Dimenhydrina　茶苯海明（標準品）　規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

Prednisoloneacea　醋酸潑尼松龍（標準品）　規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

xx　醋酸曲安奈德（標準品）　規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

Danazol　達那唑（標準品）　規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

ANHRALIN　地蒽酚（標準品）　規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

4-Hydroxyphenylaceamide　對羥基酰胺（標準品）　規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

Prochlorperazine　奮乃靜（標準品）　規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

Prochlorperazine　奮乃靜　規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

GX-221　GX221　規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

2-Aceyl-6-mehoxynaphhalene　6-甲氧基-2-萘乙酮（標準品）　規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

Phenprobama　苯丙氨酯（標準品）　規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

Halcinonide　哈西奈德（標準品）　規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

Cholinechloride　氯化膽堿（標準品）　規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

GanodericacidG　靈芝酸G(標準品)　規(guī)格：HPLC≥98%，標準品