參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：大豆內(nèi)標準lectin基因染料法PCR試劑盒
貨號:CP96872
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品運輸：低溫運輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
運輸：低溫
注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。    
10×PCR buffer                  
5 μl     dNTP mix （2mM）            
4 μl     引物1（10pM）                
2 μl     引物2（10pM）                
2 μl     Taq酶 （2U/μl）              
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法:
一、稀釋標準曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個樣品，則需要進行 N+2 個樣品提取，多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。
三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6 個用于標準曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復(fù)，則標記 N+4 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個用于PCR 陽性對照。
PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。
其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。
步驟(2)為：待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
以下是大豆內(nèi)標準lectin基因染料法PCR試劑盒公司正在熱銷的產(chǎn)品：

PLGA ELISA Kit ASH1蛋白抗體
Plg ELISA Kit 芳香乙酰胺脫乙酰基酶樣蛋白2抗體
PAP ELISA Kit 血管內(nèi)皮細胞遷移蛋白抗體
PL/Fbn ELISA Kit 醛糖還原酶相關(guān)蛋白質(zhì)抗體
FN ELISA Kit 膽汁酸結(jié)合蛋白DDH2抗體
BV ELISA Kit 血管生成素樣蛋白3抗體
Cyclin-D3 ELISA Kit 甘油酯激酶線粒體抗體
Cyclin-D2 ELISA Kit 磷酸化內(nèi)收蛋白a1抗體
Cyclin-D1 ELISA Kit 自噬體ATG16L2蛋白抗體
Cyclin-A2 ELISA Kit 酸性磷酸酶抗體
CDK2 ELISA Kit 酸性磷酸酶抗體
CCNA1 ELISA Kit 極光激酶A相互作用蛋白1抗體
SOCS-3 ELISA Kit 載脂蛋白樣蛋白6抗體
SOCS-1 ELISA Kit 凋亡相關(guān)蛋白TGFb信號抗體
cFn ELISA Kit A2LD1蛋白抗體
MEPE ELISA Kit α1,4-N-乙酰葡糖胺轉(zhuǎn)移酶α4Gn-T抗體
CYP21B ELISA Kit 芳香乙酰胺脫乙?；缚贵w
CYP21A ELISA Kit 芳香乙酰胺脫乙?；笜拥鞍?抗體

Dilution Buffer for Restriction Enzymes5x1 ml

10X Buffer Eco52I1 ml

10X Buffer SduI, Ppu21I1 ml

10X Buffer SdaI1 ml

10X Buffer Eam1105I1 ml

10X Buffer Ecl136II, PacI, SacI1 ml

10X Buffer AarI, AjiI, Bpu10I, ScaI, PasI1 ml

10X Buffer TaqI1 ml

10X Buffer KpnI1 ml

Buffer Set for Restriction Enzymes5x1 ml

10X Buffer BseXI1 ml

10X Taq Buffer with (NH4)2SO44x1.25 ml

10X Taq Buffer with (NH4)2SO4 and 20 mM MgCl24x1.25 ml

10X Taq Buffer with KCl4x1.25 ml

10X Reaction Buffer with MgCl2 for DNase I1 ml

50X TAE Buffer (Tris-acetate-EDTA)1 l

10X TBE Buffer (Tris-borate-EDTA)1 l

10X Taq Buffer without Detergent4x1.25 ml

10X Buffer BamHI, Lsp1109I5x1 ml

10X Buffer BfuI1 ml

10X Reaction Buffer for phi29 DNA Polymerase5x1 ml

10X DreamTaq™ Buffer4x1.25 ml

10X T4 DNA Ligase Buffer1.5 ml

10X DreamTaq™ Green Buffer4x1.25 ml

凋亡相關(guān)蛋白3抗體 IGFBP7/MAC25/PSF ELISA Kit 胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白7(IGFBP7/MAC25/PSF)ELISA試劑盒
自噬相關(guān)蛋白18抗體 IGFBP-5 ELISA Kit 胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白5(IGFBP-5)ELISA試劑盒
自噬相關(guān)蛋白4A抗體 IGFBP-4 ELISA Kit 胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白4(IGFBP-4)ELISA試劑盒
載脂蛋白A4抗體 IGFBP-3 ELISA Kit 胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白3(IGFBP-3)ELISA試劑盒
12脂氧合酶抗體 IGFBP2 ELISA Kit 胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白2(IGFBP2)ELISA試劑盒
血管緊張素III抗體 IGFBP-1 ELISA Kit 胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白1(IGFBP-1)ELISA試劑盒
腺苷酸環(huán)化酶3抗體 IGFBP-3 ELISA Kit 胰島素樣生長因子結(jié)合蛋3(IGFBP-3)ELISA試劑盒
血管動蛋白抗體 IGFBP-2 ELISA Kit 胰島素樣生長因子結(jié)合蛋2(IGFBP-2)ELISA試劑盒
腺病毒早期E1A蛋白抗體 IGFBP-1 ELISA Kit 胰島素樣生長因子結(jié)合蛋1(IGFBP-1)ELISA試劑盒
磷酸化活化復(fù)制因子2抗體 IGF-2R ELISA Kit 胰島素樣生長因子2受體(IGF-2R)ELISA試劑盒
大豆內(nèi)標準lectin基因染料法PCR試劑盒磷酸化活化復(fù)制因子2抗體 IGF-2 ELISA Kit 胰島素樣生長因子2(IGF-2)ELISA試劑盒
磷酸化失調(diào)癥蛋白1抗體 IGF2BP2 ELISA Kit 胰島素樣生長因子2 mRNA結(jié)合蛋白2(IGF2BP2)ELISA試劑盒
錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白17抗體 IGF-1 ELISA Kit 胰島素樣生長因子1(IGF-1)ELISA試劑盒
胞質(zhì)乙醛脫氫酶1抗體 IRS-2 ELISA Kit 胰島素受體底物2(IRS-2)ELISA試劑盒